Northern Blotting technique (नॉरदर्न् ब्लोटिंग)

नॉरदर्न् ब्लोटिंग (Northern blotting)

         आलविन् एवं उनके सहयोगियों (Alwin et. al., 1979) ने एक विधि को सफलतापूर्वक खोज निकाला और यह विधी ‘ सदर्न ब्लॉटिंग ’ से संबंधित है। तथा नॉदर्न ब्लॉटिंग कहलाती है। इस प्रविधि में m - RNA बैंड्स (bands) को जैल (gel) से एक रासायनिक क्रियाशील कागज में ब्लॉट - स्थानांतरित किया जाता है अर्थात नाइट्रोसेल्यूलोज कला में नहीं किया जाता है। जहां वे कोवैलेंटली बंधित होते हैं। क्रियाशील कागज को अमीनोबेंजाइल ऑक्सीमिथाइल (aminobenzyl oxymethly) कागज़ के डाईएजोटाईजेशन (diazotization) द्वारा तैयार किया जाता है। एक बार m - RNA के कोवेलेंटली  बॉन्ड्स रेडियोलेविल्ड DNA शलाका से संकरण के लिए प्राप्त होने के पश्चात संकरित (hybridized) बैंड्स को ऑटोरेडियोग्राफी द्वारा ज्ञात किया जा सकता है।

   dig. Northern blotting techniques 

       थॉमस (Thomas, 1980) एवं आधुनिक वैज्ञानिकों केेे अनुसार  m-rna bends को सीधा

Nitrocellulose membrane पर उपयुक्त दसाओ में blotted किया जा सकता है । क्योंकि nothern blotting के इस रूप के लिए रसायनिक सक्रिय कागज जो अमीनोबेंजोइल ऑक्सीमेथाईल कागज़ के डाइएजोडाइजेशन द्वारा तैयार किया जाता है , की आवश्यकता नहीं होती है अतः इस विधि को अनेक वैज्ञानिकों ने मान्यता प्रदान की है।

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DNA replication process of prokaryotic and eukaryotic

Synopsis :- 

1. Introduction

2. Prokaryotic DNA replication

3. Eukaryotic DNA replication

4. Similarities between Eukaryotic and Prokaryotic DNA replication.

5. Difference between prokaryotic and eukaryotic replication.

1. Introduction :- 

DNA replication वह प्रक्रिया है जिसके द्वारा मूल डीएनए स्ट्रैंड से DNA की दो समान strand  प्राप्त की जाती हैं। कोशिका विभाजन होने से पहले डीएनए दोहराता है। Prokaryotic and eukaryotic दोनों डीएनए अर्ध-रूढ़िवादी तरीके से दोहराते हैं। हालांकि, genetic material में उनके आकार और जटिलता के आधार पर Prokaryotic and eukaryotic DNA   replication में  कुछ अंतर हैं।

2. Prokaryotic DNA replication :-

यह वह प्रक्रिया है जिसके द्वारा प्रोकैरियोटिक कोशिकाओं के जीनोम दोहराए जाते हैं ताकि इसे एक बेटी कोशिका में परिवर्तित किया जा सके। डीएनए गोलाकार, डबल स्ट्रैंडेड और साइटोप्लाज्म में पाया जाता है। प्रतिकृति की एक उत्पत्ति के परिणामस्वरूप दो प्रतिकृति कांटे बनते हैं।

प्रोकैरियोटिक डीएनए की दीक्षा और बढ़ाव एंजाइम डीएनए पोलीमरेज़ III द्वारा किया जाता है। न्यूक्लियोटाइड्स को 5' से 3' दिशा में जोड़ा जाता है। गठित निक्स एंजाइम लिगेज से जुड़ते हैं।

3. Eukaryotic DNA replication :-

यूकेरियोटिक डीएनए नाभिक के अंदर मौजूद होता है। प्रक्रिया में तीन चरण शामिल हैं - initiation, elongation और termination। डीएनए हेलिसेज़ और सिंगल-स्ट्रैंड बाइंडिंग प्रोटीन अनइंडिंग और स्थिरीकरण के लिए जिम्मेदार हैं। प्रतिकृति प्रक्रिया रुकी हुई है क्योंकि एक प्रतिकृति बुलबुले के प्रमुख स्ट्रैंड दूसरे प्रतिकृति बुलबुले के लैगिंग स्ट्रैंड से मिलते हैं।

4. Similarities between prokaryotic and eukaryotic replication :-

प्रोकैरियोटिक और यूकेरियोटिक प्रतिकृति के बीच समानता को निम्नानुसार समझा जा सकता है:

a. दोनों प्रतिकृति प्रक्रियाएं परमाणु विभाजन से पहले होती हैं।

b. दोनों प्रक्रियाओं में शामिल डीएनए डबल स्ट्रैंडेड है।

c.  प्रतिकृति 5' से 3' दिशा में होती है।

d.  सिंगल-स्ट्रैंड बाइंडिंग प्रोटीन अवांछित डीएनए को स्थिर करता है।

e.  आरएनए प्राइमर को एंजाइम प्राइमेज द्वारा संश्लेषित किया जाता है।

f.   दोनों डीएनए प्रतिकृति द्वि-दिशात्मक हैं।

5. Difference between prokaryotic and eukaryotic DNA replication :-

        Prokaryotic      Eukaryotic                       replication         replication